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技術文章

Technical articles

2014
10-9

本周探討--細胞培養失敗的主要原因？？？
消毒和滅菌微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因（一）物理消毒法1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌zui為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力zui強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒，用法簡單，效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距...
2014
9-25

小牛血清使用注意事項以及正確的凍存方法
使用小牛血清時的注意事項具體如下：1.供血的新生小牛必須是健康牛的產仔，并在產后24小時內抽血，此期間不得吸取母乳。2.以無菌操作自頸動脈放血，并在無菌條件下分離血清及濾菌，全過程在36小時內完成。經濾菌的血清登一20IC保存。3.血清使用前需做細蔭、支原體培養及內毒素測定，在確實無污染的情況下方可使用。4.每批小牛血清測定總蛋白含量并分別配成10%,20%,25%于墓礎培養墓和HAT培養墓中，對骨髓瘤細胞和雜交瘤細胞進行培養，觀察小牛血清對瘤細胞和融合細胞的細胞毒性。若在2...
2014
9-23

根據歷史起源來談“植物組織培養應用前景”
19世紀30年代，德國植物學施萊登和德國動物學家施旺創立了細胞學說，根據這一學說，如果給細胞提供和生物體內一樣的條件，每個細胞都應該能夠獨立生活；1902年，德國植物學家哈伯蘭特細胞性的理論是植物組培的理論基礎。1958年，一個振奮人心的消息從美國傳向世界各地，美國植物學家斯蒂瓦特等人，用胡蘿卜的嫩皮的細胞進行培養，終于得到了完整植株，并且這一植株能夠開花結果，證實了哈伯蘭特在五十多年前關于細胞的預言。植物組培的簡單過程如下：剪接植物器官或組織——經過脫分化（也叫去分化）形成...
2014
9-23

根據歷史起源來談“植物組織培養應用前景
19世紀30年代，德國植物學施萊登和德國動物學家施旺創立了細胞學說，根據這一學說，如果給細胞提供和生物體內一樣的條件，每個細胞都應該能夠獨立生活；1902年，德國植物學家哈伯蘭特細胞性的理論是植物組培的理論基礎。1958年，一個振奮人心的消息從美國傳向世界各地，美國植物學家斯蒂瓦特等人，用胡蘿卜的嫩皮的細胞進行培養，終于得到了完整植株，并且這一植株能夠開花結果，證實了哈伯蘭特在五十多年前關于細胞的預言。植物組培的簡單過程如下：剪接植物器官或組織——經過脫分化（也叫去分化）形成...
2014
9-16

ELISA法細胞凋亡檢測操作步驟
細胞凋亡的發生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產生180bp～200bp或其倍數的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法，應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結構，可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。常見樣本以及基本操作方法：1.收集細胞，離心后，用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min。（培養細胞的上清液、血漿和血清都可作為檢測樣...
2014
9-9

大鼠胰島素ELISA試劑盒相關介紹
胰島素是由胰島B細胞受內源性或外源性物質如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質激素。胰島素是機體內*降低血糖的激素，同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成。大鼠胰島素ELISA試劑盒是一種酶聯免疫吸附技術，應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素（INS）水平。用純化的大鼠胰島素（INS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素（INS），再與HRP標記的胰島素（INS）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯...
2014
9-3

探討“ELISA實驗重復性不佳及出現白板、陽性對照不顯色”
（一）、重復性不佳可能原因及解決方法？1.樣品數量多少不一，加樣時間有長有短。重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近2.保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致。重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性。3.加樣量不一致。樣本稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。。（二）出現白板，陽性對照不顯色可能原因及解決方法？1.顯色液變質更換新的顯色液2.洗滌液配置有誤請按說明書所示稀釋倍數配制。3.未加酶結合物而認為...
2014
9-1

在同一條件下做WB實驗為什么一張膜顯影，一張膜未顯影？
近期恒遠經常接到客戶的：同一條件下，除了測的指標不一樣，為什么有張膜顯影，有張未顯影？？？上海恒遠技術分析：在同一條件下，如果一張膜顯影，一張膜未顯影，可以逐一查找原因：1、你是否兩張膜上都設有陽性對照？如果有，一張膜有信號，一張沒信號，可能是操作過程中有問題（可能原因是（1）、你結合底物會不會有問題，即沒有充分結合好，或者結合時間太短，（2）、你要確定兩張膜都是用新的底物反應液，（3）、就是沒有信號的膜會不會壓片時間太短，如果使用儀器掃片就不存在這種問題，）所以原因比較多，...

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